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PCR实验技术指南

一、引物设计 所谓“工欲善其事,必先利其器”,这年头手工设计引物的人似乎不多,还是用软件方便些,防止你一不小心看走眼,丢一个碱基,同时计算起来也方便。设计软件有很多,既可以在线设计(如Primer3 http://frodo.wi.mit.edu/cgi-...

递减PCR 降落PCR TouchDown PCR

递减PCR(TouchDown PCR) 递减PCR 通过在PCR 的前几个循环使用严紧的退火条件提高特异性。循环设在比估算的Tm 高大约5℃的退火温度下开始,然后每个循环降低1℃到2℃(当然,也可以每几个循环降1-2℃),直到退火温度低于Tm 5℃。特异性...

热启动PCR

热启动PCR(hot start PCR)是一种改良的PCR方法,主要用来避免操作过程中产生非特异性序列的扩增。将DNA聚合酶与其他反应物隔绝,或是使用在高热状况下才会活化的聚合酶,避免在未达到设定温度前就开始反应。 热启动PCR有几种方式: ...

AMV与M-MLV反转录酶

AMV来自禽成纤维病毒逆转录酶,进行性优于M-MLV,不适合太长的片段,RNase H活性强,AMV最适温度为42度。 M-MLV是Mutation过的MLV(莫洛尼氏鼠白血病病毒逆转录酶),能合成较长片断的cDNA,RNase H活性弱,M-MLV最适温度为37度。

Paralogue 和 Orthologue的区别

先看看paralogue一生物體有兩組基因組 有著共同的來源 但卻有差異像是人體中 alpha-hemoglobin beta-hemoglobin這兩種蛋白質執行相同的功能但卻屬於不同的基因組orthologue不同種間的兩組基因組但是卻有相同功能像是人和老鼠有部分的...

TRIzol Reagent 中文说明书下载

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感受态细胞制备与转化

1. 感受态细胞制备: 1)从保藏的甘油管(-40℃)挑取大肠杆菌DH5α划线于LB平板上,在37℃恒温培养过夜(16-18h)。 2)挑取单菌落于50mL LB培养基中37℃、200 r/min培养3-4h,至出现薄雾状菌悬液即可。 3)将培养液置于冰上预冷15min...

LB培养基的配制

LB培养基,是微生物学实验中最常用的培养基,用于培养大肠杆菌等细菌,其分为液态或是加入琼脂制成的固态培养基。加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。 尽管该培养基的名称被广泛解释为Luria-Bertani 培养基,...