每一个独立博客的背后,都有一颗追寻自由的心……

PCR实验技术指南

一、引物设计
所谓“工欲善其事,必先利其器”,这年头手工设计引物的人似乎不多,还是用软件方便些,防止你一不小心看走眼,丢一个碱基,同时计算起来也方便。设计软件有很多,既可以在线设计(如Primer3 http://frodo.wi.mit.edu/cgi-bin/primer3/primer3_www.cgi),也可以用Primer5、Oligo6.65 等等。

递减PCR 降落PCR TouchDown PCR

递减PCR(TouchDown PCR)

递减PCR 通过在PCR 的前几个循环使用严紧的退火条件提高特异性。循环设在比估算的Tm 高大约5℃的退火温度下开始,然后每个循环降低1℃到2℃(当然,也可以每几个循环降1-2℃),直到退火温度低于Tm 5℃。特异性最高的目的模板会被优先扩增,这些产物在随后的循环中继续扩增占据优势。递减PCR 对于那些不了解引物和目的模板同源性程度的方法更为有用,如AFLP® DNA 指纹分析。

热启动PCR

热启动PCR(hot start PCR)是一种改良的PCR方法,主要用来避免操作过程中产生非特异性序列的扩增。将DNA聚合酶与其他反应物隔绝,或是使用在高热状况下才会活化的聚合酶,避免在未达到设定温度前就开始反应。

热启动PCR有几种方式:

AMV与M-MLV反转录酶

AMV来自禽成纤维病毒逆转录酶,进行性优于M-MLV,不适合太长的片段,RNase H活性强,AMV最适温度为42度。

M-MLV是Mutation过的MLV(莫洛尼氏鼠白血病病毒逆转录酶),能合成较长片断的cDNA,RNase H活性弱,M-MLV最适温度为37度。

photoshop画矩形框

一个简单的方法就是用矩形选框工具选择一个矩形选区,然后右键选描边,可选边的宽度、颜色等,很方便啊。

xsellize源deb包下载

到/var/lib/apt/lists你可以看到所有的源列表,然后打开以Packages结尾的文件,然后查找你要的文件名。
找到文件区段后,可以看到Filename: 这个字段开头的一行文字,例如Filename: ./debs/imccontrol.deb
这时把这个地址复制到浏览器地址栏里,再在地址的前面加上源的地址,例如:d.imobilecinema.com/./debs/imccontrol.deb,最后点转到,看见没有,开始下载了!

iphone安装deb格式软件

.deb格式如何安装?也就是常说的DEB文件

第一种办法:

有WIFI的情况下打开PUTTY,先在PUTTY里面设置好IP地址(IP地址可以在小爱上WIFI连接里面找到),还有密码是“alpine”,设置好后,把.deb文件COPY到小爱的"/var/mobile"下,进入PUTTY后,在PUTTY里输入下列命令(假设你COPY进去的文件名为“happy.deb”):

第一种办法:

有WIFI的情况下打开PUTTY,先在PUTTY里面设置好IP地址(IP地址可以在小爱上WIFI连接里面找到),还有密码是“alpine”,设置好后,把.deb文件COPY到小爱的"/var/mobile"下,进入PUTTY后,在PUTTY里输入下列命令(假设你COPY进去的文件名为“happy.deb”):

[技巧]批量修改文件名和文件后缀名

一.批量修改文件名

全选---->对其中一文件重命名---->全部文件名将以XXX(*)的形式存在

如.天才 (1).JPG.... 天才 (2).JPG...

二.批量修改后缀名