常见载体的测序引物：
Primer of Vector:
Vector：Primer(F)；Primer(R)
一般引物合成说明书
1. 一般使用的定量单位是1 OD260单位。这是指1ml体积1cm广程标准比色皿中，260nm波长下吸光度为1 A260的Oligo溶液定义为1 OD260单位。根据此定义，1 OD260单位相当于33μg的OligoDNA。
2. OlogoDNA分子量的计算公式：
PCR实验技术指南
一、引物设计
所谓“工欲善其事，必先利其器”，这年头手工设计引物的人似乎不多，还是用软件方便些，防止你一不小心看走眼，丢一个碱基，同时计算起来也方便。设计软件有很多，既可以在线设计（如Primer3 http://frodo.wi.mit.edu/cgi-bin/primer3/primer3_www.cgi），也可以用Primer5、Oligo6.65 等等。
递减PCR 降落PCR TouchDown PCR
递减PCR（TouchDown PCR）
递减PCR 通过在PCR 的前几个循环使用严紧的退火条件提高特异性。循环设在比估算的Tm 高大约5℃的退火温度下开始，然后每个循环降低1℃到2℃（当然，也可以每几个循环降1－2℃），直到退火温度低于Tm 5℃。特异性最高的目的模板会被优先扩增，这些产物在随后的循环中继续扩增占据优势。递减PCR 对于那些不了解引物和目的模板同源性程度的方法更为有用，如AFLP® DNA 指纹分析。
热启动PCR
热启动PCR（hot start PCR）是一种改良的PCR方法，主要用来避免操作过程中产生非特异性序列的扩增。将DNA聚合酶与其他反应物隔绝，或是使用在高热状况下才会活化的聚合酶，避免在未达到设定温度前就开始反应。
热启动PCR有几种方式：
AMV与M-MLV反转录酶
AMV来自禽成纤维病毒逆转录酶，进行性优于M-MLV，不适合太长的片段，RNase H活性强，AMV最适温度为42度。
M-MLV是Mutation过的MLV（莫洛尼氏鼠白血病病毒逆转录酶），能合成较长片断的cDNA，RNase H活性弱，M-MLV最适温度为37度。
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