这两本手册是美国Applied Biosystems公司7300-7500型实时定量PCR仪的使用说明书，对于Real-time PCR新手入门很有帮助。很不容易在网上找到pdf版，并稍做修正，需要做这方面的朋友可以参考一下。下载地址如下： 相对定量实验入门指南 ...

今天做PCR，设定完程序运行，到快结束时一看，我明明设置了是做25个循环，咋出来26个了呢。 仔细一想才发现，在设定时 94℃ 30s 68℃ 30s 72℃ 3min Go To 1 REP 25 原来设置本来就相当于一次循环了，最后REP 24就行了，晕倒了，一直...

一、引物设计 所谓“工欲善其事，必先利其器”，这年头手工设计引物的人似乎不多，还是用软件方便些，防止你一不小心看走眼，丢一个碱基，同时计算起来也方便。设计软件有很多，既可以在线设计（如Primer3 http://frodo.wi.mit.edu/cgi-...

递减PCR（TouchDown PCR） 递减PCR 通过在PCR 的前几个循环使用严紧的退火条件提高特异性。循环设在比估算的Tm 高大约5℃的退火温度下开始，然后每个循环降低1℃到2℃（当然，也可以每几个循环降1－2℃），直到退火温度低于Tm 5℃。特异性...

热启动PCR（hot start PCR）是一种改良的PCR方法，主要用来避免操作过程中产生非特异性序列的扩增。将DNA聚合酶与其他反应物隔绝，或是使用在高热状况下才会活化的聚合酶，避免在未达到设定温度前就开始反应。 热启动PCR有几种方式： ...