常见问题及解决方案
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常见问题 |
可能原因 |
建议解决方案 |
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产率低 |
含有裂解液的样品经匀浆混匀后未在室温静置，或静置的时间不足5分钟 |
严格按照说明书操作 |
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RNA不完全溶解 |
缩短晾干时间 |
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三相分离时，吸取上清液不完全 |
尽量回收上清液 |
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A260/A280＜1.65 |
测定OD值时用的是水溶液 |
更换测定OD值时的溶液，用TE Buffer |
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TRIzol加量太少，造成蛋白质变性不充分 |
严格按照说明书操作 |
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含有裂解液的样品经匀浆混匀后未在室温静置，或静置的时间不足5分钟 |
严格按照说明书操作 |
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RNA不完全溶解 |
缩短晾干时间 |
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三相分离后，吸取上清液时不小心接触蛋白层造成污染 |
小心吸取上清 |
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RNA降解 |
使用的组织材料不够新鲜 |
提取RNA的组织材料应采用新鲜的组织材料，或将新鲜的组织材料用液氮迅速冷冻后置于-80℃保存 |
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细胞用胰酶消化 |
不要用胰酶消化细胞 |
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提取RNA时使用的试剂及器材中有RNase污染 |
做好试验前的准备工作，保证无RNase污染 |
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提取的组织材料中含有大量的RNase |
加大TRIzol的用量 |
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DNA污染 |
裂解组织或细胞使用的TRIzol量偏少 |
加大TRIzol的用量 |
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使用的组织材料中含有大量的有机溶剂（如：乙醇、异丙醇等)、高浓度的Buffer、碱性溶剂等 |
用DEPC 水充分洗涤组织 |
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多糖的污染 |
多糖的理化学性质与RNA十分接近，因此很难将其从RNA中除去 |
加大TRIzol的用量 |
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