一、引物设计 所谓“工欲善其事，必先利其器”，这年头手工设计引物的人似乎不多，还是用软件方便些，防止你一不小心看走眼，丢一个碱基，同时计算起来也方便。设计软件有很多，既可以在线设计（如Primer3 http://frodo.wi.mit.edu/cgi-...

递减PCR（TouchDown PCR） 递减PCR 通过在PCR 的前几个循环使用严紧的退火条件提高特异性。循环设在比估算的Tm 高大约5℃的退火温度下开始，然后每个循环降低1℃到2℃（当然，也可以每几个循环降1－2℃），直到退火温度低于Tm 5℃。特异性...

热启动PCR（hot start PCR）是一种改良的PCR方法，主要用来避免操作过程中产生非特异性序列的扩增。将DNA聚合酶与其他反应物隔绝，或是使用在高热状况下才会活化的聚合酶，避免在未达到设定温度前就开始反应。 热启动PCR有几种方式： ...

AMV来自禽成纤维病毒逆转录酶，进行性优于M-MLV，不适合太长的片段，RNase H活性强，AMV最适温度为42度。 M-MLV是Mutation过的MLV（莫洛尼氏鼠白血病病毒逆转录酶），能合成较长片断的cDNA，RNase H活性弱，M-MLV最适温度为37度。

先看看paralogue一生物體有兩組基因組 有著共同的來源 但卻有差異像是人體中 alpha-hemoglobin beta-hemoglobin這兩種蛋白質執行相同的功能但卻屬於不同的基因組orthologue不同種間的兩組基因組但是卻有相同功能像是人和老鼠有部分的...

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1. 感受态细胞制备： 1)从保藏的甘油管(-40℃)挑取大肠杆菌DH5α划线于LB平板上，在37℃恒温培养过夜(16-18h)。 2)挑取单菌落于50mL LB培养基中37℃、200 r/min培养3-4h，至出现薄雾状菌悬液即可。 3)将培养液置于冰上预冷15min...

LB培养基，是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养大肠杆菌等细菌，其分为液态或是加入琼脂制成的固态培养基。加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。 尽管该培养基的名称被广泛解释为Luria-Bertani 培养基，...